転載：化学薬品中の関連物質の分析方法についての考察

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　　化学薬品中の関連物質の分析方法についての検討　　要約：目的：HPLC法を用いて薬品中の関連物質を定量分析する方法について概説し、それぞれの長所と短所を明らかにし、具体的な事例も挙げる。関連物質の検出、関連物質の定性・定量分析、および関連する品質管理基準の確立は、医薬品の安全性と有効性を保証するための重要な要素であり、HPLC法を用いて医薬品の関連物質を定量分析する際には、具体的な状況に応じて適切な定量分析方法を選択する必要がある。 　　キーワード：化学薬品、関連物質、分析方法　化学薬品中の関連物質は、医薬品の純度に大きな影響を与え、薬効の低下を引き起こしたり、人体に害を及ぼしたり、重篤な副作用が発生したりする可能性があります。化学薬品の関連物質は多くが有機物であり、その出所は主に薬剤の製造過程における中間体である。　　1 アナピリン中の関連物質のHPLC法による分析　　1.1 装置および試薬の準備　　HPLC法による分析に必要な主な装置は、HPLC装置、電子天秤、pH試験紙であり、使用する試薬にはメタノール、トリエチルアミン、超純水、およびリン酸二水素ナトリウム二水塩が含まれる。　　1.2 溶液の調製　アンニリン試料を正確に50mg計量し、10mLの容量フラスコに入れる。次に無水メタノールで溶解させ、目盛りまで希釈して、濃度5mg/mLの溶液サンプルを作成し、これを試験品溶液とする。溶液は使うたびに調製する必要があり、長期間保管したサンプルは使用できない。また、4-N-デメチルアセトアミノフェンを正確に5mg計量し、200mLの容量フラスコに入れる。そこにメタノールを加えて目盛りまで希釈し、よく振って、濃度2.5μg/mLの溶液サンプルを作成し、これを対照溶液とする。

1.3 クロマトグラフィーの条件
クロマトグラフィーカラムはODSC184.6×150mm、5μmを使用する。HPLC装置の検出波長は254nmに設定される。流動相としてのメタノールとリン酸塩緩衝液（濃度6.0g/Lの水和二水素ナトリウムリン酸塩1000mLに三エチルアミン1mLを加え、高濃度の水酸化ナトリウムを用いてpH値を7に調整）の比率は25:75であり、流速は1.0mL/min、注入量は10μlである。

1.4 注入
上記のHPLC装置の条件のもとで、試験品溶液および対照溶液をそれぞれ10μlずつ取り、薬局方の規定に従ってHPLC装置に注入する。得られたクロマトグラムから、4-N-デメチルアセトアミノフェンの出現時間は約6分であることがわかる。これにより、アセトアミノフェンサンプルに含まれる不純物の種類を特定することができる。また、4-N-デメチルアセトアミノフェンのピークも明確に確認できる。　　色相図には未同定不純物1および未同定不純物2も存在し、アナピリンの生成過程における関連物質から、これら2つの未同定不純物はそれぞれフルオロアミノアンチピリンおよびアミノアンチピリンである可能性が高いと判断される。HPLC装置の動作条件を変えずに、合成中間体であるフルオロアミノアンチピリンおよびアミノアンチピリンをクロマトグラフィー分析し、適量のこれら2つの物質をアナセトン錠のサンプルに同時に加えることで、2種類の対照品のクロマトグラムが得られる。クロマトグラムを比較分析することにより、2つの未知の不純物の保持時間がフルオロアミノアンチピリンおよびアミノアンチピリンと完全に一致していることがわかり、2種類の対照品を加えた後、元々存在していた2つの不純物のクロマトグラム上のピークが明らかに高くなっているのが確認できる。これら2点から、アンアンナイキン中の2種類の未知不純物はそれぞれフルオレイムアンチピリンとアミノアンチピリンであると判断できる。　　2 UPLC法によるシトシン三リン酸二ナトリウム塩化ナトリウム注射液の関連物質の分析　　2.1 機器および試薬の準備　　UPLC法による分析に必要な機器は、主にUPLC装置や電子天秤であり、使用する試薬にはクエン酸、クエン酸ナトリウム、テトラブチルアンモニウムブロミド、および濃度10％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシド溶液、超純水が含まれる。　　2.2 溶液の調製　酸による分解処理：シトシン三リン酸二ナトリウム塩化ナトリウム注射液10mLに、2mol/lのHCl溶液1mLを加え、沸騰した水中で2時間放置する。取り出して冷却した後、pH値を6.5に調整し、水10mLを加える。　　アルカリで溶液を破壊し、シトシン三リン酸二ナトリウム塩化ナトリウム注射液10mLに3mol/lのNaOH溶液1mLを加え、沸騰水中で2時間放置した後、取り出して冷却しpH値を6.5に調整し、さらに水10mLを加える。　　酸化破壊溶液：シトシン三リン酸二ナトリウム塩化ナトリウム注射液10mLに、30％過酸化水素溶液1mLを加え、沸騰水に2時間浸した後、取り出して冷却しpH値を6.5に調整し、さらに水10mLを加える。　　酸化破壊ブランク溶液：30％過酸化水素溶液1mLを取り、水10mLを加え、沸騰水に2時間浸した後、取り出して冷却し、pH値を6.5に調整したのち、さらに水10mLを加える。　　高温破壊溶液：シトシン三リン酸二ナトリウム塩化ナトリウム注射液10mLを沸騰した水に4時間浸し、取り出して冷却した後、さらに水10mLを加える。　　2.3 クロマトグラフィーの操作条件
クロマトグラフィーカラムはHSS T3 50mm×2.1nm、1.8μmを使用し、UPLC装置の検出波長は280nmに設定されている。流動相はシトラート緩衝液であり、9.76gのシトラ酸と1.03gのシトラ酸ナトリウムを1000mLの容器に入れ、まず900mLの水を加えて溶解させ、pH値を3.0に調整する。その後、10％濃度のテトラブチルアンモニウムヒドロキシド2.5mLを加え、最後に水を加えて容量を満たす。流速は1.0mL/分、サンプル量は10μl、カラム温度は25℃である。

2.4 サンプルの注入
上記のクロマトグラフィー条件のもとで、各種溶液を10μlずつ取り、薬局方の規定に従ってUPLC装置に注入する。得られたクロマトグラムは以下の通りである。
シトイド二ナトリウム・塩化ナトリウムの主要成分の保持時間は14.7分であり、酸やアルカリ、高温、酸化によって分解された後、各種関連物質は主ピークから十分に分離される。専門的な実験により、これらの関連物質がそれぞれ一リン酸シトイド二ナトリウムおよび二リン酸シトイド二ナトリウムであることが確認された。

3 結論
人々の生活水準が向上し、健康意識も高まるにつれて、医薬品の品質に対する要求もますます厳しくなっている。したがって、化学医薬品中の各成分を正確に判定・分析し、その含有量をコントロールすることで、医薬品の品質を向上させる必要がある。HPLCおよびUPLCは、化学薬品の関連物質判定における有効な手法であるため、これら2つの手法についての理解と習得を深め、関連物質分析の効率を向上させるべきである。　　参考文献：　　黄紅深。 アンネイジン関連物質の検査. 北方薬学, 2011, (02): 7-8.　　李涛、胡昌勤、毕開順。 ロバスタチン関連物質のHPLC分析法の最適化。薬物分析雑誌、2011、(09)：1707-1714。雷勇勝、宋麗明、蔣慶峰。 液体クロマトグラフィー・質量分析法の医薬品関連物質分析への応用. 現代機器, 2011, (04): 9-13+8.　張彤、周長明、韓南銀。 HPLC法によるシトシン三リン酸二ナトリウム注射液の関連物質および含量の測定. 薬物分析雑誌, 2013, (01): 154-158.　　 Luis P.Backfill. A Theory of Distribution Camel Structure. California University出版, 2001, 21.　　　　 Louis Stem and Ambary. Marketing Chillier. 第5版. Upper Saddle River, Yinghuiyun.com, Prentice Hall, 2003, 14-15.　　　　 Coughlin, Anent, Erin Anderson, Louis W. Stefan, El-Ambary. Marketing Channels (第6版). 北京：清華大学出版社, 2001, 20.　　出典：http://www.yinghuiyun.com/fanwen/fen*huaxue/