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液体クロマトグラフィーを使用する際には、どのような点に注意すべきでしょうか?

2017-08-03View Original

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液体クロマトグラフィーを使用する際には、どのような点に注意すべきでしょうか?
Reply #22017-08-03
1. 標準溶液に機械的雑質はない; 2. 手動注入:シリンジを十分に洗浄し、気泡を効果的に除去し、正確に定量する。注入バルブの切り替えは迅速に行い、注入が終了したら超純水で注入バルブを洗浄する; 3. 自動注入:サンプル溶液の十分な深さを確保する(針先が液面下に沈まないように);サンプル溶液に気泡がないことを保証し、特にチューブを使用する場合;キャップの締め付け具合は適度でなければならず、緩すぎるとサンプルの溶剤が揮発し、きつすぎるとキャップが変形して外れる可能性がある;針が刺さったときに破片が針の穴を塞がないよう、古すぎるボトルパッドは避けてください。
Reply #32017-08-03
1、クロマトグラフィーカラム内の流動相がなくなってしまう問題:クロマトグラフィーによる分離実験を行う人の多くが、流動相をタイムリーに補充しないことで、ポンプが溶媒ボトル内の流動相をすべて吸い取ってしまい、HPLCシステムが動作を停止してしまうという状況に遭遇したことがある。このような場合、クロマトグラフィーカラムが損傷するだろうか?ポンプはカラム内の流動相をすべて排出してしまったのだろうか?カラムはまだ使用可能なのだろうか?実際には、ポンプが溶媒ボトル内の流動相をすべて吸い取っても、クロマトグラフィーカラムが損傷することはない。たとえポンプ内に空気が溜まっていても、ポンプは空気をカラム内に送り込むことはない。なぜなら、ポンプは液体しか送液できず、空気は送液できないからだ。

2、クロマトグラフィーカラムが乾燥してしまう問題:もう一つ起こり得る状況としては、カラムの両端のシールキャップを忘れて閉め忘れたり、キャップが緩んでいるためにカラムが乾燥してしまうことがある。同様に、カラム全体が乾燥してしまうことはあまり起こらず、おそらくはカラムの両端の数ミリ程度が乾燥してしまうだけだろう。なぜなら、すべての溶媒が揮発してしまうにはかなりの時間が必要だからだ。たとえカラムが本当に乾燥してしまっても、必ずしも修復不可能というわけではない。完全に脱気された、表面張力が低い溶媒(例えばヘリウムガスで脱気されたメタノールなど)を使ってカラムを洗浄し、気体を除去することができる。低い表面張力は、充填剤の表面を浸透しやすくする;脱気済みの溶媒は、充填剤に留まっているガスを溶解し除去することができるはずです。クロマトグラフィーカラムは、(1mL/分の流速で)1時間以上洗浄することで完全に浸透し、正常な状態に戻ります。3、PEEK(ポリエーテルエーテルケトン)製の配管や接続部を使用する際には、以下の点に注意する必要があります。頻繁に流路を変更したり、異なるブランドのクロマトグラフィーカラムを交換したりする場合、PEEK素材で作られた配管や接続部を使用すると非常に便利です。PEEK製の配管は接続しやすいです;PEEK継手は工具が不要で手でねじ込むだけで固定できるだけでなく、コーンクランプの外側にある配管の長さを簡単に調整できるため、異なるブランドや規格のクロマトグラフィーカラムとの接続が容易です。このような材料の配管を使用する際に注意すべき点は、PEEKはハロゲン化アルカンやフランとの互換性が悪いことです。上記の溶剤がPEEK材料を溶解する明らかな兆候は観察されていませんが、PEEKはこれらの溶剤に触れるともろくなります。もう一つ考慮すべき点は圧力制限です。ステンレス鋼管は6000psiの圧力に耐えられますが、PEEK管は約4000psiしか耐えられません(ただし、ほとんどのHPLCアプリケーションシステムの圧力は3000psiを超えません)。PEEK継手を使用する場合、継手が溶剤に直接接触することはほとんどないため、溶剤耐性について心配する必要はありません。しかし、手でねじ込んで固定するPEEK継手の圧力制限はステンレス鋼管よりも低いため、圧力が高すぎると継手が配管内で滑ってデッドボリュームや漏れが発生する可能性があります。4、液体ポンプの故障予防:適切に動作しているポンプであれば、クロマトグラム上のベースラインを安定させることができるはずです;保持時間の再現性が良い。等度洗浄時の圧力変動は2%未満である。勾配洗浄時の圧力変化は緩やかかつ安定していなければならない。ポンプの良好な動作性能を維持するためには、システムの清掃を行い、溶媒および試薬の品質を確保し、流動相を濾過・脱気する必要がある。以下に、ポンプの故障を防ぐためのいくつかの対策を挙げる:1)高品質の試薬およびHPLC級の溶媒を使用する; 2)流動相と溶媒のろ過; 3)脱気; 4)毎日使用を開始する際は排気を行い、作業終了後はポンプから緩衝液を洗い流す; 5)ポンプ内に水や腐食性溶剤が滞留しないようにする; 6)定期的にワッシャーを交換する; 7)必要に応じて潤滑油を添加する; 8)ポンプの操作マニュアルに記載されているその他の推奨事項を確認する。9)故障が発生した際に迅速に対処できるよう、通常はシール、チェックバルブ(入口および出口)、ポンプヘッド装置、各種接続部品、ヒューズなどの部品、および交換用ツールを常備しておくべきである。
Reply #42017-11-14
クロマトグラフィーによる分離を行うエンジニアリング会社は、主にどこに集中していますか?江浙沪は多いですか?

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