На что следует обратить внимание при использовании жидкостной хроматографии?
Thread Content
На что следует обратить внимание при использовании жидкостной хроматографии?
1. В растворе образца отсутствуют механические примеси； 2. Ручная подача образца: эффективная очистка шприца, полное удаление пузырьков воздуха, точное количественное определение, быстрое переключение клапана подачи образца, после завершения процедуры подачи — очистка клапана подачи образца с помощью сверхчистой воды ； 3. Автоматическая подача образца: обеспечивает достаточную глубину раствора образца (чтобы кончик иглы мог погрузиться под поверхность жидкости) ； Убедиться, что в образце раствора нет пузырьков, особенно при использовании зонда ； Крышка бутылки должна быть подходящей по затягиванию: если она слишком слабо затянута, растворитель в образце будет испаряться; если слишком туго — прокладка внутри бутылки может деформироваться и отвалиться ； Используйте подкладки для бутылок, которые не слишком старые, чтобы из-за царапин осколки не заблокировали отверстие иглы.
1. Вопрос о возможности полного вытеснения флюида из колонки хроматографии: многие люди, занимающиеся экспериментами с хроматографическим разделением, сталкивались с такой ситуацией: из-за невнимательности флюид в бутылке с растворителем не пополнялся вовремя, и насос высасывал его до конца. В результате система HPLC переставала работать. Но может ли это привести к повреждению колонки хроматографии? Высосал ли насос весь флюид из колонки? Можно ли продолжать использовать колонку? На самом деле, если насос высасывает флюид до конца, это не приводит к повреждению колонки. Даже если в насосе скапливается воздух, он не сможет попасть в колонку, поскольку насос способен перекачивать только жидкости, а не воздух.
2. Проблема высыхания колонки хроматографии: ещё одной возможной причиной является забывание закрыть крышки на концах колонки или их недостаточное затягивание, что приводит к высыханию колонки. Однако полное высыхание всей колонки встречается редко; скорее всего, высыхают лишь несколько миллиметров на концах колонки. Чтобы колонка полностью высохла, требуется довольно много времени, поскольку для испарения всего растворителя нужно время. Даже если колонка действительно высохла, это ещё не значит, что с ней ничего нельзя сделать. Можно попробовать промыть колонку растворителем с низкой поверхностным натяжением и без газов (например, метанолом, обезгазированным с помощью гелия). Низкое поверхностное натяжение способствует лучшему проникновению растворителя в поверхность наполнителя колонки； Дегазированный растворитель должен способствовать растворению и удалению газов, застрявших в наполнителе. Чтобы хроматографическая колонка полностью пропиталась растворителем и вернулась к нормальному состоянию, необходимо промывать её в течение часа или даже дольше при скорости потока 1 мл/мин. 3. При использовании трубок и соединителей из PEEK (полиэтерэтеркетон) следует учитывать следующие моменты: если часто требуется менять маршрут потока или заменять хроматографические колонки разных производителей, использование трубок и соединителей из PEEK значительно упрощает работу. Трубки из PEEK легко соединяются между собой ； Соединители из PEEK не только можно закрепить вручную без использования инструментов, но и легко регулировать длину трубопровода за пределами конусной оболочки, что упрощает подключение к хроматографическим колонкам разных брендов или спецификаций. При использовании трубопроводов из этого материала следует учитывать, что PEEK плохо совместим с галогенированными алканами и фураном. Хотя не наблюдалось явных признаков растворения материала PEEK под действием этих растворителей, при контакте с ними PEEK становится хрупким. Еще одним фактором, на который следует обратить внимание, является предел давления. Нержавеющие трубы могут выдерживать давление до 6000 psi, в то время как трубы из PEEK — всего около 4000 psi (хотя в большинстве систем HPLC давление не превышает 3000 psi). При использовании соединителей из PEEK нет необходимости беспокоиться о их стойкости к растворителям, поскольку соединители практически не соприкасаются с растворителями напрямую. Однако предел давления для соединителей из PEEK, закрепляемых вручную, ниже, чем у нержавеющих труб; поэтому при слишком высоком давлении соединитель может соскользнуть по трубопроводу, что приведет к появлению «мертвого объема» или утечке жидкости. 4. Предотвращение неисправностей жидкостного насоса: насос, находящийся в хорошем рабочем состоянии, должен обеспечивать стабильную основную линию на графике хроматографии ； Повторяемость времени удержания высока. При изотропном элюировании колебания давления составляют менее 2%. При градиентном элюировании изменения давления должны быть медленными и плавными. Для обеспечения надлежащей работы насоса необходимо поддерживать чистоту системы, контролировать качество растворителей и реагентов, а также фильтровать и дегазировать поток движущей среды. Ниже приведены несколько мер по предотвращению неисправностей насоса: 1) использование реагентов высокого качества и растворителей класса HPLC ； 2) Фильтрация флюидного фазы и растворителя ； 3) дегазация ； 4) Перед началом ежедневной работы необходимо сливать воздух из системы; по окончании работы буферный раствор следует смыть из насоса ； 5) Не допускать застоя воды или коррозионных растворителей в насосе ； 6) Регулярная замена прокладок ； 7) При необходимости добавить смазку ； 8) Ознакомьтесь с другими рекомендациями, приведёнными в руководстве по эксплуатации насоса. 9) Чтобы как можно быстрее устранять неисправности, следует всегда иметь под рукой уплотнения, обратные клапаны (на входе и выходе), элементы крыльчатки насоса, различные соединители, предохранители и другие компоненты, а также инструменты для замены.
2. Проблема высыхания колонки хроматографии: ещё одной возможной причиной является забывание закрыть крышки на концах колонки или их недостаточное затягивание, что приводит к высыханию колонки. Однако полное высыхание всей колонки встречается редко; скорее всего, высыхают лишь несколько миллиметров на концах колонки. Чтобы колонка полностью высохла, требуется довольно много времени, поскольку для испарения всего растворителя нужно время. Даже если колонка действительно высохла, это ещё не значит, что с ней ничего нельзя сделать. Можно попробовать промыть колонку растворителем с низкой поверхностным натяжением и без газов (например, метанолом, обезгазированным с помощью гелия). Низкое поверхностное натяжение способствует лучшему проникновению растворителя в поверхность наполнителя колонки； Дегазированный растворитель должен способствовать растворению и удалению газов, застрявших в наполнителе. Чтобы хроматографическая колонка полностью пропиталась растворителем и вернулась к нормальному состоянию, необходимо промывать её в течение часа или даже дольше при скорости потока 1 мл/мин. 3. При использовании трубок и соединителей из PEEK (полиэтерэтеркетон) следует учитывать следующие моменты: если часто требуется менять маршрут потока или заменять хроматографические колонки разных производителей, использование трубок и соединителей из PEEK значительно упрощает работу. Трубки из PEEK легко соединяются между собой ； Соединители из PEEK не только можно закрепить вручную без использования инструментов, но и легко регулировать длину трубопровода за пределами конусной оболочки, что упрощает подключение к хроматографическим колонкам разных брендов или спецификаций. При использовании трубопроводов из этого материала следует учитывать, что PEEK плохо совместим с галогенированными алканами и фураном. Хотя не наблюдалось явных признаков растворения материала PEEK под действием этих растворителей, при контакте с ними PEEK становится хрупким. Еще одним фактором, на который следует обратить внимание, является предел давления. Нержавеющие трубы могут выдерживать давление до 6000 psi, в то время как трубы из PEEK — всего около 4000 psi (хотя в большинстве систем HPLC давление не превышает 3000 psi). При использовании соединителей из PEEK нет необходимости беспокоиться о их стойкости к растворителям, поскольку соединители практически не соприкасаются с растворителями напрямую. Однако предел давления для соединителей из PEEK, закрепляемых вручную, ниже, чем у нержавеющих труб; поэтому при слишком высоком давлении соединитель может соскользнуть по трубопроводу, что приведет к появлению «мертвого объема» или утечке жидкости. 4. Предотвращение неисправностей жидкостного насоса: насос, находящийся в хорошем рабочем состоянии, должен обеспечивать стабильную основную линию на графике хроматографии ； Повторяемость времени удержания высока. При изотропном элюировании колебания давления составляют менее 2%. При градиентном элюировании изменения давления должны быть медленными и плавными. Для обеспечения надлежащей работы насоса необходимо поддерживать чистоту системы, контролировать качество растворителей и реагентов, а также фильтровать и дегазировать поток движущей среды. Ниже приведены несколько мер по предотвращению неисправностей насоса: 1) использование реагентов высокого качества и растворителей класса HPLC ； 2) Фильтрация флюидного фазы и растворителя ； 3) дегазация ； 4) Перед началом ежедневной работы необходимо сливать воздух из системы; по окончании работы буферный раствор следует смыть из насоса ； 5) Не допускать застоя воды или коррозионных растворителей в насосе ； 6) Регулярная замена прокладок ； 7) При необходимости добавить смазку ； 8) Ознакомьтесь с другими рекомендациями, приведёнными в руководстве по эксплуатации насоса. 9) Чтобы как можно быстрее устранять неисправности, следует всегда иметь под рукой уплотнения, обратные клапаны (на входе и выходе), элементы крыльчатки насоса, различные соединители, предохранители и другие компоненты, а также инструменты для замены.
Где в основном расположены инженерные компании, занимающиеся хроматографическим разделением? Много в Цзянсу, Чжэцзяне и Шанхае?